Purification, Characterization and Some Kinetic Properties of Fructose 1,6 Bisphosphate Aldolase from Human Placenta

Fructose–1,6–bisphosphate aldolase (E.C. 4.1.2.13) is a major glycolytic enzyme found in most cells. Fructose-1,6- bisphosphate aldolase reversibly catalyses the cleavage of fructose 1,6-bisphosphate into the triose phosphates: Dglyceraldehyde phosphate and dihydroxyacetone phosphate. In this study, we wanted to examine the presence of aldolase in healthy human placenta and then to purify the enzyme. We also determined the optimum conditions (time, pH, and temperature) of enzyme assay measurements. With this procedure, we determined the specific activity of placental aldolase as 831.90 mU/mg protein and aldolase was purified about 40.5 fold from healthy human placenta. It was demonstrated that the molecular weight of human placental aldolase was 160 kD. In this study, substrate kinetics were also examined. Enzymatic assays were performed and substrate kinetic properties were detected and Vm value of healthy placental FBPA was determined as 1769.513 ± 200.322, and Km as 20.003 ± 4.497 mM.

İnsan Plasentasından Fruktoz 1,6-Bisfosfat Aldolaz’ın Saflastırılması, Tanımlanması ve Bazı Kinetik Özellikleri

Fruktoz–1,6–bisfosfat aldolaz (E.C. 4.1.2.13) pek çok hücrede bulunan major bir glikolitik enzimdir. Fruktoz–1,6– bisfosfat aldolaz geri dönüsümlü olarak fruktoz–1,6–bisfosfat’ın iki trioz fosfata; D-gliseraldehit 3-fosfat ve dihidroksiaseton fosfat’a bölünmesini katalizler. Bu çalısmada amacımız sağlıklı insan plasentasında aldolaz enziminin varlığını incelemek, ve enzimi saflastırmaktır. Bu çalısmaya ek olarak enzim aktivitesi tayini için kullanılan yöntemin optimum sartlarını (zaman, pH, ve sıcaklık) da tayin etmektir. Bu islemde plasental aldolaz’ın spesifik aktivitesi 831.90 mU/mg protein olarak bulunmus ve enzim sağlıklı insan plasentasından 40.5 kere saflastırılmıstır. Moleküler ağırlığı 160 kD olarak tespit edilmistir. Çalısmada sübstrat kinetiği de incelenmistir. Enzimatik assay ve sübstrat kinetiği özellikleri incelendiğinde Vm değerinin 1769.513 ± 200.322 mM ve Km değerinin ise 20.003 ± 4.497 mM olduğu bulunmustur.